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本试剂盒时一种简单快捷的水痘-带状疱疹病毒探针法荧光定量PCR检测试剂盒。

水痘-带状疱疹病毒(Varicella-Zoster Virus，VZV)是一种儿童初次感染引起水痘，恢复后病毒潜伏在体内，少数病人在成人后病毒再发而引起带状疱疹的病毒。水痘是具有高度传染性的儿童常见疾病，多发于2～6岁，传染源主要是患者，患者急性期水痘内容物及呼吸道分泌物内均含有病毒。曾患过水痘的病人引起带状疱疹后，初期局部皮肤有异常感，搔痒、疼痛，进而出现红疹、疱疹，串连成带状，以躯干和面额部为多见，呈单侧分布，病程约3周左右，少数可达数月之久，还有可能出现脑脊髓炎和眼结膜炎等并发症。该病毒对人体健康有长期潜在危害，且该病毒可以有效检测野生株和疫苗株，因此水痘-带状疱疹病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。

• 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
  
• 引物和探针经过优化，灵敏性高。
  
• 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
  
• 特异性高，引物是根据水痘-带状疱疹病毒设计，不会跟其他病毒株DNA发生交叉反应。
  
• 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
  
• 本产品只能用于科研。

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
   
2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
   
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
   
4. 换枪头，在6号管中加入5μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
   
5. 换枪头，在5号管中加入5μL 1×10⁶拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10⁵拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
   
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

7. 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
   
8. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。

9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（用第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
   
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
    

    成分	样品管N+2个	PCR阴性 对照管	标准曲线管 （2～7管）
    2×Probe qPCR Magic Mix	10μL	10μL	各10μL
    水痘-带状疱疹病毒qPCR探针	1μL	1μL	各1μL
    水痘-带状疱疹病毒探针法qPCR引物混合液	2μL	2μL	各2μL
    N+2个待测DNA模板	7μL	-	-
    超纯水	-	7μL	-
    第7步所得标准曲线样品稀释液（2～7号）	-	-	各7μL

    
    
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
    

    过程	温度	时间
    预变性	95℃	3min
    PCR反应 （40个循环）	95℃	15sec
    	60℃	1min（采集FAM通道的荧光信号）

12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
    
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。若重复结果Ct值小于40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。